Virus PED (PEDV) gây tiêu chảy cấp trên lợn và đặc biệt nguy hiểm đối với lợn con theo mẹ. Nghiên cứu phân lập PEDV là tiền đề tốt cho các nghiên cứu về sản xuất vắc xin hay các chế phẩm sinh học trong phòng và trị bệnh. Vì vậy việc lựa chọn được điều kiện thích hợp cho phân lập PEDV và xác định một số đặc điểm sinh học của các chủng PEDV phân lập ở Việt Nam là vô cùng cần thiết. Mẫu ruột non của lợn được chẩn đoán dương tính với PED dựa trên kỹ thuật RT-PCR và dòng tế bào Vero được sử dụng cho nghiên cứu này. Các chủng PEDV phân lập được xác định hiệu giá virus và dựng đường cong sinh trưởng. Kết quả đã phân lập thành công 13 PEDV từ 83 mẫu bệnh phẩm. Môi trường phân lập có bổ sung 10 µg/ml trypsin là thích hợp cho phân lập virus. PEDV thích ứng và gây bệnh tích tế bào bắt đầu ở đời cấy chuyển thứ 2. Bệnh tích tế bào biểu hiện rõ với các đám tế bào bị dung giải màng, nhân tế bào co cụm lại với nhau hình thành các thể hợp bào. Bệnh tích tế bào xuất hiện ở 12 giờ sau gây nhiễm và tế bào bị phá hủy hoàn toàn sau 36 – 48 giờ gây nhiễm. Hiệu giá virus ở đời đầu tiên khi xuất hiện bệnh tích tế bào đạt từ 103,4 TCID50/ml đến 105,7 TCID50/ml. Sau 4 đời cấy chuyển liên tiếp hiệu giá virus có xu hướng tăng đạt từ 105,3 TCID50/ml đến 107,3 TCID50/ml.
Isolation and Identification of Biological Characteristics of Porcine Epidemic Diarrhea Virus
Porcine Epidemic Diarrhea Virus (PEDV) causes acute diarrhea in pigs and this is especially dangerous for piglets. Isolation of PEDV is a pre-requisite for research on production of vaccines or bioformulations in the prevention and treatment of the disease. Small intestines of pigs diagnosed positively with PEDV based on RT-PCR method and vero cell lines were used for this study. PEDV isolations were determined for the viral titre and the growth curve. A total of 13 PEDV strains were successfully isolated from 83 disease samples. The medium containing 10µg/ml trypsin was suitable for viral isolation. PEDV was permissive for replication and caused disease at the beginning of the second culture passage. Infected vero cell cultures exhibited characteristics CPE by cell-fusion and syncytial formation. CPE occured at 12 hours post infection and the cells were completely destroyed after 36 to 48 hours of infection. In the first passage, CPE viral titre ranged from 103,4 to 105,7 TCID50/ml but after 4 culture passages, the viral titre increased from 105,3 to 107,3 TCID50/ml.
Hình 3. Bệnh tích tế bào do PEDV gây ra trên tế bào Vero ở các thời điểm khác nhau
Ghi chú: A: CPE sau 8 giờ gây nhiễm PEDV, B: CPE sau 12 giờ gây nhiễm PEDV, C: CPE sau 24 giờ gây nhiễm PEDV, D: CPE sau 36 giờ gây nhiễm PEDV
Thông tin chi tiết truy cập tại: https://sti.vista.gov.vn/tw/Lists/TaiLieuKHCN/Attachments/285320/CTv169V16S032018257.pdf
English